laboratorio N ° 1

Universidad Latina

Facultad de ciencias de la salud Doctor William C. Gorgas

Escuela de Farmacia

                          Reconocimiento de sustancias orgánicas

Integrantes: Jair De frias, Melany Sánchez, Beatriz Villareal, Joiceline Justavino, Luis Caballero, Lizbeth Buckridge,  Jacqueline Gan, Julissa Liu, Yorlenis Palma.

Tema: Reconocimiento de sustancias orgánicas

Los principales componentes de todos los seres vivos son las sustancias orgánicas (ya sean las proteínas, carbohidratos, lípidos y ácidos nucleicos). Cada tipo particular de molécula presenta propiedades particulares que hacen posible su reconocimiento mediante reacciones químicas.

Objetivos:

ü  Utilizar distintas técnicas y reactivos para reconocer sustancias orgánicas.

ü  Determinar la composición química de los alimentos.

ü    Comprobar cuales son las sustancias orgánicas que componen a las sustancias.

ü    Reconocer algunos tipos de bio-moléculas que componen las principales sustancias orgánicas de los seres vivos.

ü   Se utilizan reactivos para cada sustancia en particular, un indicador especifica (reactivo) que al reaccionar provoca un cambio de color característico con el cual se puede reconocer la presencia de una sustancia en particular.

ü   

Reconocimiento de presencia de proteínas

Ejercicio A

Objetivo:

Reconocer la presencia de proteínas. Para ello se utilizará un reactivo químico conocido como Reactivo de Biuret. Este indicador es de color azulado y al mezclarlo con proteínas toma el color rojizo ladrillo.

Materiales:

·         3 tubos de ensayo

·         HCl  concentrado

·         Clara de huevo fresco en agua

·         Solución de almidón en agua (1%)

·         Agua

1. COAGULACIÓN DE LAS PROTEÍNAS    FUNDAMENTO
Las proteínas debido al gran tamaño de sus moléculas forman con el agua soluciones coloidales que pueden precipitar formándose coágulos al ser calentadas a temperaturas superiores a 70ºC o al ser tratadas con soluciones salinas, ácidos, alcohol, etc.
La coagulación de las proteínas es un proceso irreversible y se debe a su desnaturalización por los agentes indicados que al actuar sobre la proteína la desordenan por destrucción de sus estructuras secundaria y terciaria.

Procedimiento:

ü  Colocar en un tubo 2-3 ml de clara de huevo fresco o leche.

ü  Colocar en el 2ndo tubo 1-2ml de solución de almidón.

ü  Colocar en el 3er tubo 1-2ml de agua.

ü   Someter al calor los 3 tubos. Repetir 1-3 y agregar 2-3 ml d ácido clorhídrico concentrado.

ü   Anotar en la tabla los resultados.

ü  Comparar datos obtenidos

Resultados:

Tubo Nº	Contenido	Acción del calor	Acc. Del ácido clorhídrico
1	Clara de huevo	Estado sólido color blanco	Estado sólido color blanco
2	almidón	Evaporación
3	huevo	Evaporación	Solución hervida

Cuestionario sobre la experiencia:

1.    ¿Qué función cumple el tubo 3?

R. El tubo 3 cumple la función del tubo testigo, que es el tubo modelo que utilizamos para comparar con los otros ensayos.

                2. ¿Cuál de los tubos dirían que contiene proteínas? ¿Cómo lo determinaron?

R. Diría que el tubo que contiene proteínas es el tubo 1 el cual posee la clara de huevo, por que reacciona igual en los dos experimentos, se solidifica.

            3. ¿Qué resultado esperarían obtener si sometieran al calor o al ácido     clorhídrico en una solución de glucosa? ¿Por qué?

R. No hubiese tenido reacción porque es un hidrato de carbono.

           4.  ¿Cómo explicarían el resultado obtenido en el tubo 2?

R. Se evapora ya que es una proteína, es un hidrato de carbono (polisacárido).

           5. Averigüen cuál es la sustancia que forma la clara de huevo

R. La sustancia que forma a la clara de huevo es la albumina.

2. REACCIONES COLOREADAS ESPECÍFICAS (BIURET)

     FUNDAMENTO
Entre las reacciones coloreadas específicas de las proteínas, que sirven por tanto para su identificación, destaca la reacción del Biuret. Esta reacción la producen los péptidos y las proteínas, pero no los aminoácidos ya que se debe a la presencia del enlace peptídico CO-NH que se destruye al liberarse los aminoácidos.
El reactivo del Biuret lleva sulfato de Cobre(II) y sosa, y el Cu, en un medio fuertemente alcalino, se coordina con los enlaces peptídicos formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentración de proteínas.

     TÉCNICA

1. Colocar en un tubo de ensayo 3ml de solución de albúmina al 2%.
2. Añadir 4-5 gotas de solución de SO₄Cu al 1%.
3. Añadir 3ml de solución de NaOH al 20%.
4. Agitar para que se mezcle bien.
5. Observar los resultados.

Reconocimiento de presencia de Carbohidratos

Ejercicio b

Objetivo:

Reconocer la presencia de dos tipos de carbohidratos: la glucosa y el almidón. Se utilizarán diferentes reactivos. Uno de ellos es el reactivo de lugol que es un reactivo que ante la presencia de almidón cambia su color de caramelo a azul. El otro reactivo es el reactivo de fehling el cual esta formado por la mezcla de dos componentes, fehling a (celeste) y fehling b (incoloro). Este reactivo indica la presencia de azúcares cuando cambia de color a rojo ladrillo. Coloque los tubos en un baño de agua hirviendo por 5 minutos. Tenga cuidado de no quemarse

Materiales:

·         6 tubos de ensayo

·         Reactivo de fehling o benedict

·         Lugol

·         Solución de glucosa (1%)

·         Solución de almidón

·         Clara de huevo en agua

Procedimiento:

Tubo Nº	Soluciones	Reactivos	Coloración después del agregado del reactivo
1	agua	Fehling	Azul, no cambio- -
2	solución de glucosa	Fehling	Rojo ladrillo. Posee hidratos de carbono
3	solución de almidón	Fehling	Azul, no cambio
4	clara de huevo	Fehling	Violeta oscuro, no posee hidratos de carbono
5	agua	Lugol	No hubo cambio
6	solución de glucosa	Lugol	No hubo cambio
7	solución de almidón	Lugol	Si hubo cambio, el almidón quedo en el fondo y su color era caramelo
8	clara de huevo	Lugol	no hubo cambio
9	Jugo de limón	Lugol	amarillo

Cuestionario sobre la experiencia:

 1.  ¿Qué función cumplen los tubos 1 y 5?

R. los tubos 1 y 5 son los tubos testigos, ya que son los modelos al representar el verdadero color de los reactivos de benedict y del lugol sucesivamente.

2.  ¿encontraron diferencias entre los resultados 2 y 6?

R. en el tubo 2 cambio a color ladrillo ya que reconoció algún azúcar, en cambio en el tubo 6 no ocurrió nada.

3.  La glucosa y el almidón pertenecen a un grupo de los carbohidratos. ¿Qué diferencia existe entre la estructura química de ambos tipos de sustancias?

R. la glucosa es simple ya que posee una sola molécula en cambio el almidón es compuesta porque posee más de una molécula.

4.  Si se degradara el almidón hasta obtener las unidades que lo constituyen, ¿qué reactivo utilizarían para reconocer la presencia de esas unidades? ¿Cómo podrían averiguar si todo el almidón fue degradado o si quedan aún moléculas de almidón en el tubo?

R. Para conocer la presencia de las unidades que lo constituyen utilizaría el reactivo de fehling. Para averiguar si todo el almidón fue degradado agregaría lugol.

5. ¿reaccionó alguno de los indicadores empleados con los componentes de la clara de huevo? ¿Por qué? ¿consideran que el empleo de otro reactivo les permitiría reconocer las sustancias presentes en ese alimento? ¿Cuál podría ser ese reactivo?

R. No reaccciono ninguno con los componentes de la clara de huevo por una proteína. Habria que calentarla.

Reconocimiento de la presencia de lípidos

Ejercicio C

Objetivo:

En esta experiencia se reconocerán la presencia de lípidos mediante un ensayo simple que consiste en detectar la mancha traslúcida que dejan este tipo de sustancias en el papel.

Materiales:

·         4 trozos de papel blanco

·         Aceite comestible

·         Solución de glucosa

·         Agua

·         Gotero

Procedimiento:

Si se trata de un lípido sólido, como grasa, frotarlo contra un papel blanco; si se trata de lípidos líquidos, como aceites, viertan algunas gotas sobre el papel. En ambos casos, después de 5 minutos, la aparición de una mancha traslúcida sobre el papel indicará la presencia de lípidos en la muestra analizada.

Resultados:

Papel Nº	Ensayo	Presencia de una mancha traslúcida
1	papel	No dejo mancha
2	papel + agua	No dejo mancha
3	papel + aceite	Deja mancha al secarse
4	papel+solución de glucosa	No dejo mancha

Cuestionario sobre la experiencia:

A) ¿Qué diferencia encontraron entre el papel 3 y 4?

R. la diferencia entre el papel 3 y el 4 es que el papel 3 se mantuvo con una mancha traslucida, diferente fue el caso del papel 4 en la que no quedo ninguna mancha.

B) ¿Se secó la mancha de aceite, como la de agua o la de solución de glucosa? ¿Por qué?

R. no, debido a que el aceite contiene lípidos, por lo tanto deja mancha.

C) ¿Qué resultado creen que hubieran obtenido si hubieran vertido gotas de una solución de clara de huevo sobre el papel?

R. creo que se hubiera secado y no hubiera dejado mancha debido a que no contiene grasas y lípidos.

D) ¿Qué reactivo hubieran utilizado para detectar la presencia de glucosa en el papel 4?

R. hubiera utilizado reactivo de fehling

2. TINCIÓN

     FUNDAMENTO
Los lípidos se colorean selectivamente de rojo-anaranjado con el colorante Sudán III.

     TÉCNICA

1. Disponer en una gradilla 2 tubos de ensayo colocando en ambos 2ml de aceite.
2. Añadir a uno de los tubos 4-5 gotas de solución alcohólica de Sudán III.
3. Al otro tubo añadir 4-5 gotas de tinta roja.
4. Agitar ambos tubos y dejar reposar.
5. Observar los resultados: en el tubo con Sudán III todo el aceite tiene que aparecer teñido, mientras que en el tubo con tinta, ésta se irá al fondo y el aceite no estará teñido.

3. SOLUBILIDAD

     FUNDAMENTO
Los lípidos son insolubles en agua. Cuando se agitan fuertemente en ella se dividen en pequeñísimas gotas formando una emulsión de aspecto lechoso, que es transitoria, pues desaparece en reposo por reagrupación de las gotitas de grasa en una capa que, por su menor densidad, se sitúa sobre el agua.
Por el contrario, las grasas son solubles en disolventes orgánicos, como el éter, cloroformo, acetona, benceno, etc.

     TÉCNICA

1. Poner 2ml de aceite en dos tubos de ensayo.
2. Añadir a uno de ellos 2ml de agua y al otro 2ml de éter u otro disolvente orgánico,
3. Agitar fuertemente ambos tubos y dejar reposar.
4. Observar los resultados: Se verá cómo el aceite se ha disuelto en el éter y, en cambio no lo hace en el agua y el aceite subirá debido a su menor densidad.

CUESTIONARIO SOBRE LA EXPERIENCIA

1. ¿Qué son los jabones?

R. Son lípidos saponificables (es decir, que pueden realizar el proceso de saponificación y son hidrolizables). Son la sal de un ácido graso.

2.    ¿Cómo se pueden obtener los jabones?

R. Mediante el proceso de saponificación, siendo una hidrólisis de un ácido graso que tiene lugar en medio alcalino y se realiza con NaOH o con KOH.

3. ¿Por qué en la saponificación la glicerina aparece en la fase acuosa?

R. Porque en la saponificación, se utilizan grasas y éstas están compuestas por ácidos grasos y glicerina. Como resultado se obtiene una fase semisólida que es la sal de sodio de los ácidos grasos (el jabón), por lo tanto, en la fase acuosa quedará el alcohol (glicerina) como subproducto de la elaboración del jabón puesto que es parcialmente soluble en agua, por lo que no hay razón para que no esté presente en esta forma.

4. ¿Qué enzima logra en el aparato digestivo la hidrólisis de las grasas?

R. Concretamente en el estómago la enzima lipasa gástrica y en el intestino delgado la lipasa pancreática-colipasa.

5. Indica lo que ocurre con la mezcla aceite-Sudán III y aceite-tinta y explica a qué se debe la diferencia entre ambos resultados.

R. Cuando se mezcla el aceite con el Sudán III, todo el aceite se tiñe de rojo puesto que es un colorante lipofilo (soluble en grasas) y debido a esa afinidad se utiliza para revelar la presencia de grasas. Pero la tinta roja no es soluble en grasas, por esa razón, el aceite no se tiñe de rojo con la tinta china roja puesto que no se mezclan, y la tinta se deposita en el fondo.

6. ¿Qué ocurre con la emulsión de agua en aceite transcurridos unos minutos de reposo? ¿Y con la de benceno y aceite? ¿A qué se deben las diferencias observadas entre ambas emulsiones?

R. Cuando se mezcla el aceite con el Sudán III, todo el aceite se tiñe de rojo puesto que es un colorante lipófilo (soluble en grasas) y debido a esa afinidad se utiliza para revelar la presencia de grasas. Pero la tinta roja no es soluble en grasas, por esa razón, el aceite no se tiñe de rojo con la tinta china roja puesto que no se mezclan, y la tinta se deposita en el fondo.

Análisis: Se prepararon las mezclas cada uno por separada. Al momento de unirlas estas reaccionaron y formaron una gama de diferentes colores que al paso del tiempo estos iban cambiando.

           

        

Conclusiones generales

La clara de huevo obtiene un color blanquecino ya que las proteínas globulares de la clara del huevo se desenrollan al ser calentadas y se enlazan entre si lo que permite que la misma parezca estar cocinada. Dentro de un intervalo de temperatura entre 0°C y 40°C a 50°C, la mayor parte de las proteínas son cada vez más inestables y comienzan a desnaturalizarse, por lo común con pérdida de solubilidad.

Las proteínas debido a su gran tamaño forman con el agua soluciones coloides, la reacción biuret no ocurriría en los aminoácidos, porque estos no presentan enlaces peptídicos en su estructuras, y la reacción biuret reconoce los enlaces peptídicos de las proteínas. Siendo la desnaturalización la propiedad fundamental de las mismas. Gracias a las pruebas cualitativas se puede constatar la presencia o ausencia de quien contiene la mayor cantidad de proteínas en los alimentos que consumimos.

 En el reconocimiento de carbohidratos se pudo observar que la solución de glucosa en conjunto con el benedict la formación de un precipitado amarillo o rojo ladrillo lo que es prueba positiva para carbohidratos reductores. En el agua, no se produce una reacción con la experiencia de yodo, esto debido a que el agua no es un azúcar, y la coloración que se presentó en el tubo, fue de color del reactivo del lugol.

Las grasas y aceites, también llamadas triglicéridos, son también otro tipo de lípidos. Estos sirven como depósitos de reserva de energía de las células animal y vegetales.

La presencia de lípidos se reconoce mediante un ensayo simple que consiste en detectar la mancha translucida que dejan estas sustancias en un papel, se produjo presencia de lípidos (papel + aceite).